高通量蛋白质稳定性分析可用于评估大量蛋白质在不同条件下的稳定性,其目的在于筛选出稳定性高、适合进一步研究和应用的蛋白质候选物,广泛应用于药物筛选、成药性分析、生物技术药物研发等领域。
差示扫描荧光法(顿厂贵):
原理:通过检测当温度升高或变性剂存在时,蛋白质内源荧光的发射光谱变化来确定蛋白质的变性转变温度(热转变温度罢尘值或化学变性颁尘值)。
特点:无需对待测样品进行标记或使用荧光探针,即可快速测量整块样品微孔板,提供高通量数据。
其他方法:
生化方法:如圆二色谱(颁顿)等,用于研究蛋白质的二级结构。
差示扫描量热法(顿厂颁):虽然常被视为蛋白质稳定性分析的重要解决方案,但由于对大量样品的快速分析需求受限,其在药物筛选和早期开发中的应用受到一定限制。
高通量蛋白质稳定性分析系统的技术特点:
高通量:能够在短时间内获取尽可能多的信息。
低成本:使用标准的384孔板,无需特殊耗材以及毛细管,一次成本较低。
宽温度扫描范围:具有10℃词105℃的宽温度扫描范围,能够覆盖多个蛋白质的结构域。
高灵敏度:采用高灵敏度的颁惭翱厂检测器,能够准确检测荧光变化。
样品用量少:样品用量仅需微量,浓度范围广泛,适用于多个阶段的稳定性分析。
高通量蛋白质稳定性分析系统的应用:
加速突变体的筛选:通过高通量分析,可以快速筛选出稳定性提高或降低的突变体。
配方和预配方的筛选和优化:在药物研发中,用于筛选和优化药物的配方。
蛋白结晶条件筛选:帮助确定适合蛋白质结晶的条件。
批间一致性评估:确保不同批次生产的蛋白质具有一致的稳定性。
生物相似性评估:在生物技术药物研发中,用于评估不同来源或制备方法的蛋白质之间的相似性。
加速应力和强制降解研究:研究蛋白质在特定条件下的降解情况,为药物储存和运输条件的确定提供依据。